ПЦР анализ – что это такое, расшифровка, вирусная нагрузка

Содержание

Количественный анализ на гепатит с: расшифровка, пцр, норма, таблица – Про Кровь

ПЦР анализ – что это такое, расшифровка, вирусная нагрузка

Многие знают, что гепатит — болезнь не только опасная, но и коварная, ведь диагностировать ее непросто. Иногда пациенту приходится пройти целый ряд исследований — от анализа крови на наличие антител до УЗИ печени. Заболевание диагностируется непосредственно по крови, а остальные исследования демонстрируют, в какой степени печень повреждена гепатитом.

Наиболее эффективный и современный метод — это метод ПЦР (полимеразная цепная реакция). Расшифровка количественного анализа на вирус гепатита С или В выявляет разновидность болезни и дает понимание, как вирус будет мутировать в организме человека.

ПЦР-анализ и его виды

Быстрый и точный ПЦР-анализ ищет возбудителя следующим образом: при исследовании существенно увеличивается часть ДНК вируса в образце крови. Взятую у человека кровь помещают в особые реактивы, и начинается клонирование клеток. Появление сотен ДНК позволяет обнаружить возбудителя еще на ранней стадии.

ПЦР-анализ бывает нескольких видов:

  • Качественный анализ. Это исследование показывает, что в крови присутствуют гены-«вредители». Качественный анализ подтвердил опасения? Значит, следует провести количественное исследование, чтобы установить степень развития вируса. Результат обозначается простыми словами: «обнаружено» или «не обнаружено». В первом случае в организме пациента найдены РНК вируса, значит, человек уже болен. Во втором случае кровь чиста от гена вируса. Чтобы не оставалось сомнений, специалисты рекомендуют спустя 10 дней сдать повторный анализ.
  • Количественный анализ. Такой вид исследования определяет, в каком количестве в крови присутствуют гены вируса, насколько тяжелая степень у заболевания. О результате говорят слова «положительно», «отрицательно» и «недействительный».
    1. Под словом «положительно» понимается инфекционная нагрузка. Такой метод диагностики нужен медикам, чтобы отслеживать, действует ли терапия. Время проведения анализа — 4, 12, 16 и 24 недели болезни. Показатель, не превышающий 8х10т МЕ/мл, свидетельствует об эффективности лечения.
    2. Результат «отрицательно» говорит, что ген инфекции отсутствует.
    3. «Недействительный» бывает тогда, когда ген вируса был обнаружен при качественном исследовании, но количественный анализ его не выявил. Такое случается при объеме инфекции ниже уровня.

Не все пациенты сдают количественный анализ (в этом его отличие от качественного). Если качественный подтверждает или опровергает присутствие «врага», то количественный подтверждает диагноз, помогает спрогнозировать развитие заболевания и определиться с терапией.

Количество РНК до начала лечения и во время терапии демонстрирует эффективность работы с пациентом. Кроме того, по числу РНК врачи понимают, какие дозы лекарств нужны больному.

Когда нужен количественный анализ

Если в крови были найдены антитела к гепатиту, то за качественным анализом следует количественный. «Пожертвовать» кровью больному придется несколько раз.

  • Сначала — еще до того, как будет принято решение о курсе терапии, т.е. при первичной диагностике.
  • Затем во время лечения — это необходимо, чтобы видеть клиническую картину результатов (как правило, на 1, 4, 12 и 24 неделях).
  • Финальный анализ проводится после терапии — он показывает, возможен ли рецидив.

Врач, использующий количественный анализ как один из основных методов исследования, преследует несколько целей:

  1. Медик должен понимать, насколько глубоко вирус проник в организм, какое количество антигенов присутствует в теле больного.
  2. Доктор определяет, действует ли терапия.
  3. Врач подбирает метод лечения и составляет прогноз.
  4. Метод дополняет анализ крови, биопсию, эластометрию и т.п.

Существует несколько показаний к проведению количественного анализа:

  1. Надо определить вирусную нагрузку и взять под контроль антивирусную терапию.
  2. Результаты качественного ПЦР-анализа говорят о наличии антител гепатита С.
  3. Пациент страдает от острого или хронического гепатита С.
  4. У больного найден микст-гепатит.
  5. Необходимость четко спланировать терапию.
  6. После 12 недель лечения результаты качественного анализа все еще показывают присутствие вируса.

  Норма печеночных проб у взрослых, таблица

Подготовка к сдаче крови

Для исследования нужна кровь из вены. Есть ряд простых стандартных правил, которых должен придерживаться пациент:

  1. Лучше всего отправиться на анализ утром натощак, до этого в течение 8-12 часов воздерживаться от пищи.
  2. У человека не всегда есть возможность пройти исследование именно утром. В таком случае завтрак должен быть диетическим; после завтрака также следует «пост» (8-12 часов).
  3. За 1-2 дня до сдачи крови пациент должен отказаться от спиртного и жирной/жареной пищи.
  4. После обильного застолья приходить на анализ нельзя.
  5. Как минимум за час до сдачи крови человек не должен курить.
  6. Пациенту понадобится 10-15 минут спокойствия перед тем, как сдать биоматериал. Для чего нужна такая релаксация? Физическое и эмоциональное напряжение способно повлиять на результат, следовательно, человеку необходимо расслабиться.
  7. Лечащий врач должен знать, принимает ли пациент какие-то препараты. Если да, то после последнего приема надо выждать 10-14 дней. Возможно, доктор изменит условия.
  8. Если человек проходил физиотерапевтические процедуры, рентгенографию или ректальное исследование, то сдавать кровь придется через определенное время.
  9. Реагенты, оборудование, единицы измерения и, конечно, точность в разных лабораториях могут отличаться. Лучше сдавать первичный и повторные анализы в одном месте.

Когда будут известны результаты? Зависит от конкретной лаборатории и занятости ее сотрудников. Уже через 4-5 часов можно подвести итоги и уже на следующий день получить заключение.

Расшифровка результатов

Иногда о результатах говорят не цифры, а слова — «не обнаружено» или «ниже диапазона измерений».

  • «Не обнаружено» означает, что вирус не найден.
  • Слова «ниже диапазона изменений» говорят о том, что инфекция присутствует в небольшом количестве. В таком случае нужен количественный анализ, который «чувствительнее» качественного.

Медики ориентируются на вирусную нагрузку. Специалисты должны выяснить, сколько вирусных РНК содержится в 1 мл крови.

Принято пользоваться формулой МЕ/мл, но в некоторых лабораториях число измеряется в копиях/мл. Коэффициенты перевода варьируются от 1 до 5, важно, какой метод используется при определении количества.

Разные тест-системы предлагают свои варианты перевода компонентов в международные значения. Разработана таблица расшифровки количественного анализа на гепатит С, и вы можете ознакомиться с ее данными. Нормам ПЦР соответствуют определенные значения вирусной нагрузки:

Не обнаруженоЭто значит, что все в норме, вирус не найден, человек здоров.
До 1.8*102 МЕ/мл (7,5*102 копий/мл)Такая концентрация вируса не превышает линию границы.
До 8*105 МЕ/мл (2*106 копий/мл)Вирусная нагрузка низкая. Терапия оказывает хорошее действие, прогноз благоприятен.
Больше 8*105 МЕ/мл (2*106 копий/мл)Вирусная нагрузка большая.
Больше 2,4*107 МЕ/мл (1*108 копий/мл)Концентрация вируса превышает линейный диапазон.

Если здоровый человек сдает количественный анализ на гепатит С, то его норма — результат «не обнаружено». Для тех, кому не повезло заболеть, нормы другие.

Количество вируса в их организме должно снижаться, о чем говорит убывание нулей в результате анализа: с 1*106 МЕ/мл до 1*105 МЕ/мл и т.д.

При использовании амплификатора концентрация вируса не должна покидать границы от 1,8*102 до 2,4*107 МЕ/мл.

Когда можно утверждать, что лечение производит нужный эффект? В том случае, если при повторном исследовании нагрузка меньше 8*105 МЕ/мл.

Какова вероятность раннего вирусологического ответа? Примерно 85%. В таком случае на третий день терапии снижается количество вирусных РНК.

  УЗИ печени: что показывает, как подготовиться, расшифровка

При показателе, превышающем 8*105 МЕ/мл, необходимо поменять тактику лечения. Зависимость простая: чем выше уровень, тем печальнее прогноз.

Что касается гепатита В, то за норму приняты такие значения вирусной нагрузки:

Меньше 103Вирусная нагрузка низкая, вирус пассивен.
От 104 до 105Вирусная нагрузка низкая, как правило, вирус пассивен.
От 106Вирусная нагрузка умеренная. Вирус проявляет активность.
От 107Вирусная нагрузка высокая. Вирус очень активен.

Узнав количество вируса, медики получают возможность определить форму болезни — острую, хроническую или носительство. Эта информация помогает понять, надо ли проводить дополнительные исследования. Результаты рассказывают, как вирус и пораженный им организм реагируют на терапию:

  1. Превышающее норму значение трансаминазы говорит о хроническом гепатите В, как и активность вируса больше 4 наравне с количеством ДНК-копий 105/мл.
  2. Стандартный уровень трансаминазы и концентрация ниже 105/мл — это носительство.
  3. При гепатите В нужно все время отслеживать устойчивость, каждые 3 месяца отправляясь на анализы. Внезапно увеличившаяся в 10 раз вирусная нагрузка — свидетельство того, что коварный вирус стал устойчив к лекарствам.
  4. Если через 3 дня лечения нагрузка снизилась на 85%, то ход терапии можно назвать благоприятным.
  5. Иногда показатель АЛТ превышает норму (не чаще 2 раз за полгода), а вирусная нагрузка становится выше 105/мл. В таком случае нужна биопсия печени. Если же уровень АЛТ повышается чаще 2 раз за 6 месяцев, а вирус очень активен, то немедленно назначается антивирусная терапия.

И доктору, и пациенту хочется знать, как вирус поведет себя, переходя из острой формы в хроническую. Прогноз таков:

Количество ДНК гепатита В меньше 2*104 копий/млОстрый гепатит не превратится в хронический.
Количество ДНК варьируется от 2*104 копий/мл до 2*106 копий/мл25-30% хронизации. Каждый четвертый пациент останется с хроническим гепатитом В.
Количество ДНК превышает 2*106 копий/млК сожалению, хронической формы не избежать.

Результаты, выходящие за пределы нормы, — это тревожный сигнал: вирус размножается, и болезнь готова вернуться.

Преимущества методики

У ПЦР-анализа масса плюсов:

  1. Точность метода позволяет быстро определиться с диагнозом и начать лечение.
  2. Скорость. Нет необходимости разграничивать и выращивать разные виды возбудителя. Четко налаженный процесс позволяет оперативно получить результат всего за 4-5 часов.
  3. Возбудитель определяется прямым путем. Найдена «та самая» часть ДНК? Значит, диагноз ясен. Например, обнаруживающий белки-маркеры ИФА находит лишь продукты жизнедеятельности бактерий, но не дает полной гарантии.
  4. Специфичность исследования. Возможна реакция на ложные совместно-реагирующие агенты, но в данном случае исследуется только то вещество, которое характерно именно для конкретного возбудителя.
  5. Даже самое незначительное количество вируса будет обнаружено, значит, восприимчивость — еще один плюс.
  6. Универсальность метода. Способность найти фрагменты ДНК или РНК конкретных организмов позволяет работать при беспомощности других методов и использовать один материал для диагностики.
  7. ПЦР-анализ обнаруживает и явные, и скрытые инфекции, изучая даже стойкие и не выращиваемые агенты.

Качественный и количественный анализ ПЦР на гепатит С: отрицательный, положительный, расшифровка

ПЦР анализ – что это такое, расшифровка, вирусная нагрузка

Гепатит С — вирусное заболевание печени, вызываемое флавивирусом HCV (от англ. hepatitis C virus), в структуре которого содержится молекула рибонуклеиновой кислоты (РНК). РНК несет генетический код вируса. Ее наличие позволяет проводить анализ ПЦР на гепатит С.

Опасность HCV для человека заключается и в том, что так называемое серологическое окно (промежуток времени между заражением и появлением реакции со стороны иммунной системы) может быть достаточно длительным — от нескольких недель до шести месяцев.

Это не дает обнаружить инфицирование и начать лечение вовремя.

В зависимости от индивидуальных особенностей организма носителя HCV может проявляться в острой форме, а также протекать как хроническое заболевание, которое потребует длительного и дорогостоящего лечения. При выявлении антител к HCV проводится ряд лабораторных анализов, в том числе ПЦР на гепатит С. Этот тест делается всем людям, в чьей крови были найдены антитела к HCV.

Что такое анализ ПЦР?

Лабораторный анализ ПЦР на гепатит С — исследование биологического материала с целью выявить наличие флававируса.

Полимеразная цепная реакция (так расшифровывается аббревиатура) показывает количественное значение вирусного поражения организма, его качественные характеристики, а также генотип вируса, содержащего РНК.

На их основе, а также на базе дополнительных анализов определяется способ и длительность терапии, а также эпидемиологический фактор (степень риска передачи другому носителю).

Что такое РНК-анализ на гепатит С?

ПЦР гепатита С еще называют РНК-анализом (HCV RNA), т.к. флававирус содержит в себе частицу РНК размером вириона 30-60 нм. Одной из особенностей этого микроорганизма является высокая склонность к мутациям.

Каждый из подвидов (генотипов) вируса имеет различную резистентность, что обуславливает разные методики лечения и характер дальнейшего прогноза для пациента.

Биологический материал (венозная кровь) сдается натощак и, как правило, тестируется методом Real-Time PCR (высокочувствительной диагностики в режиме реального времени с нижним лимитом определения 15 МЕ/мл с применением закрытых автоматизированных систем).

Существуют другие тесты, например COBAS AMPLICOR с сенситивностью 50-100 МЕ/мл. Для любого лабораторного исследования важен порог чувствительности, т.е. способности реагента выявить минимальную концентрацию вируса в биологическом материале.

Референсное значение теста (нормальные показатели) — «не найдено».

Виды анализа на гепатит С методом ПЦР

ПЦР на гепатит С включает в себя три важных составляющих:

  • качественный анализ;
  • количественный анализ;
  • генотипирование.

Эти тесты позволяют определить характер виремии, а также генетические признаки возбудителя. В зависимости от чувствительности диагностической системы, исследование проводится один раз, и иногда для подтверждения или уточнения результатов делается повторный тест с более чувствительным реагентом.

Качественный ПЦР гепатита С

Анализ ПЦР на гепатит С качественный — это другое общее название анализа полимеразной цепной реакции. Стандартная чувствительность теста, позволяющего выявить наличие вирусного поражения, находится в пределах 10-500 МЕ/мл.

Негативный анализ ПЦР на гепатит С показывает, что концентрация вируса в крови пациента находится ниже порога восприимчивости диагностической системы.

Если качественный ПЦР дал ответ «не обнаружено», то для последующего лечения важно узнать порог чувствительности реагента.

Положительный ответ на ПЦР анализ на гепатит С может быть дан уже на 4-5 сутки после заражения HCV.

Белковые фракции к флававирусу появляются значительно позже.

Количественный ПЦР гепатита С

ПЦР гепатит С количественный — это показатель вирусной нагрузки, который отображает уровень концентрации РНК флававируса в организме.

Это показатель, отображающий, сколько фрагментов вирусной РНК содержится на один кубический сантиметр крови.

Результаты ПЦР РНК гепатита С количественного теста в общепринятой системе обозначаются в международных единицах на миллилитр (МЕ/мл) и могут записываться разными способами, например — 1,7 млн или 1.700.000 МЕ/мл.

Количественная ПЦР диагностика гепатита С назначается пациентам перед началом противовирусной терапии, и на 12 неделе лечения, чтобы оценить результаты выбранного метода борьбы с HCV. Вирусная нагрузка позволяет определить три важных показателя заболевания:

  • инфекционность, т.е. степень риска передачи вируса от одного носителя к другому (чем выше концентрация РНК флававируса, тем выше вероятность заразить другого человека, например, при половом контакте);
  • метод и эффективность лечения;
  • длительность и прогноз противовирусной терапии (чем выше вирусная нагрузка, тем дольше длится лечение).

Количественная ПЦР диагностика гепатита С зависит от типа лабораторного теста и порога его чувствительности. Нижней границей нормы принято считать показатель до 600.000 МЕ/мл, среднее значение находится в пределах 600.000-700.000 МЕ/мл. Результаты от 800.000 МЕ/мл и выше считаются высоким уровнем концентрации РНК-содержащего вируса.

Важно: нет прямой связи между уровнем HCV RNA в крови и тяжестью заболевания. У больного может быть очень высокая вирусная нагрузка, но это еще не свидетельствует о том, что имеется серьезное поражение клеток печени.

Генотипирование

Ввиду высокой мутационной активности HCV в природе при тестировании важно выявить, какой именно генотип вируса находится в крови пациента. Всего на планете зафиксировано 11 генотипов вируса гепатита С, в которые входят множество подвидов (субтипов). На территории РФ распространены 1,2 и 3.

ПЦР РНК гепатита С вместе с генотипированием — очень важная составляющая анализа, т.к. позволяет врачу определить резистентность (устойчивость) вируса, подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения.

Разные генотипы HCV по-разному поддаются противовирусной терапии.

Например, 1 генотип требует до 48 недель лечения, а его эффективность в среднем составляет 60%, тогда как 2 и 3 генотипы лечатся в два раза быстрее с эффективностью до 85%.

Генотипирование также позволяет и косвенно определить состояние печени. Например, 3 генотип HCV нередко сопровождается стеатозом, при котором в клетках органа накапливается жир.

Анализ крови на ПЦР при гепатите С должен выдать цифру, определяющую генотип.

В лабораторных ответах может быть написано «не типируется» — и это значит, что в крови человека находится вирус, не определяемый тестовой системой.

Это может говорить о том, что генотип нехарактерен для данной географической зоны. В этом случае следует повторно сдать анализ с более высокой чувствительностью системы диагностирования.

Расшифровка анализа ПЦР на гепатит С

Тест на гепатит С ПЦР количественный расшифровать можно на основе приведенных выше данных. При получении результатов лабораторных анализов обычно пишутся следующие данные:

  • «найдено»/ «не найдено» (ПЦР качественный на гепатит С);
  • количество РНК-содержащих фракций, например 831.680 ME/мл (анализ на ПЦР количественный);
  • цифра, определяющая генотип HCV, например — 1, 2, 3, 4;
  • название теста — чаще всего Real-time.

Наиболее важным при расшифровке анализа ПЦР на гепатит С считается второй пункт, который показывает вирусную нагрузку, определяющую прогноз, способ и длительность лечения.

Важно: в результате теста рядом с цифрой, показывающей генотип, может стоять латинская буква, например, 1а, что обозначает субтип вируса. Для врача он не имеет значения: для выбора метода лечения берется только генотип.

Если ПЦР анализ на гепатит С отрицательный, а ИФА положительный — что это значит?

Для расшифровки лабораторных анализов важно обратиться к гепатологу или инфекционисту, который разъяснит полученную информацию в соответствии с видом диагностической системы и порогом ее чувствительности. В медицинской практике существует множество данных анализов крови, которые могут ввести человека без медицинского образования в заблуждение.

Например, если тест на гепатит С ПЦР отрицательный, а ИФА положительный, то может обозначать, что в данный момент в крови пациента нет HCV, но ранее он перенес острую форму гепатита С.

 Принято считать, что позитивный иммуноферментный анализ (ИФА) показывает, что в крови есть антитела, выработанные после вторжения вируса в прошлом.

Но в современной медицинской практике ИФА анализ считается недостаточно надежным и нередко дает нетипичные результаты, поэтому врачи используют его в качестве первичного скрининга. При диагностике заболевания специалисты ориентируются именно на ПЦР тесты.

В следующем видео очень подробно и интересно рассказывается, в чем суть метода ПЦР, как проводится анализ:

Заключение

Для анализа на ПЦР гепатита С обычно берется венозная кровь. Чаще всего происходит двойной забор биологического материала — для ИФА, и непосредственно для ПЦР теста. Для корректных результатов тестов требуется соблюдение основных правил лабораторного забора биологического материала:

  • кровь на анализ сдается в первой половине дня натощак;
  • между приемом пищи и забором крови должно пройти не менее 8 часов;
  • перед сдачей анализа нужно также исключить алкоголь и жареную пищу;
  • в течение суток перед сдачей крови необходимо избегать высоких физических нагрузок.

Результаты тестирования крови обычно готовы на следующий день.

Пцр на гепатит c: количественный и качественный анализ, расшифровка результатов

ПЦР анализ – что это такое, расшифровка, вирусная нагрузка

ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.

Виды ПЦР

ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.

Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл.

При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл.

Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн.

МЕ, то результат выглядит следующим образом – 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель – число копий на 1 мл крови (1 МЕ – это 4 копии РНК).

Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.

При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.

Рекомендуемые товары

Показания для анализа

Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:

  • У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
  • Проводятся скрининговые профилактические исследования.
  • Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
  • Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
  • Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
  • У пациента диагностирован цирроз.
  • Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.

Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита

Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

Пациент должен следовать следующим правилам:

  • Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
  • Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
  • Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
  • Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).

Расшифровка результатов ПЦР-исследования

Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.

Качественный анализ. Расшифровка

ОбнаруженоПациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса.
Не обнаруженоПациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности.

Количественный анализ. Расшифровка

Не обнаруженоЧеловек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности.
До 1,8*102 МЕ/млКонцентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование.
До 8*105 МЕ/млНизкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении.
Больше 8*105 МЕ/млВысокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С.
Больше 2,4*107 МЕ/млПоскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови.

Генотипирование. Расшифровка

Обнаружена РНК определенного генотипаВ биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3.
Обнаружена РНК вируса гепатита СВ биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования.
Не обнаруженоЧеловек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса.

Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.

В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:

  1. Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
  2. Загрязнение образца крови.
  3. Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
  4. Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).

Преимущества ПЦР-анализа

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса.

ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины).

С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа – низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

Недостатки ПЦР

Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

  • В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
  • Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
  • Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.

Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

Цена ПЦР-анализа на гепатит С

В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области – от 300 до 800 рублей.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В – от 1200 до 10000 рублей.

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.

Что такое ПЦР анализ и вирусная нагрузка?

ПЦР анализ – что это такое, расшифровка, вирусная нагрузка

Почему необходим анализ ПЦР при подозрении на гепатит С, что это такое?

Вирус гепатита С – РНК содержащий вирус, имеет 6 генотипов и до 500 субтипов. Из всех гепатитов этот вирус обладает самой высокой мутационной способностью и преодолевает защитный барьер иммунной системы. Из общего числа заболевших гепатитами, вирус С стал причиной 70% случаев хронической формы и 30% цирроза и рака печени.

Для справки! Диагностика гепатита С, опасного вирусного заболевания печени, стала возможной после внедрения в клиническую практику анализов с помощью ПЦР. До этого времени вирус оставался «невидимым» для исследователей, не реагируя на обычные методы определения инфекции.

Суть способа: часть исследуемого гена с помощью специальных ферментов и условий заставляют размножаться в пробирке. Анализ ПЦР позволяет определить штамм вируса, без которого невозможно провести результативное лечение: каждый генотип по-разному чувствителен к антивирусным препаратам. Применяется два типа ПЦР:

  • качественный;
  • количественный.

Противовирусная терапия нуждается в постоянном контроле, чтобы своевременно скорректировать лечение, для этих целей также используется полимеразная цепная реакция.

Качественный и количественный ПЦР

ПЦР качественный на гепатит С дает ответ: есть ли в крови пациента штамм вируса С и какой именно. Генотипирование необходимо для уточнения диагноза, прогноза заболевания и определения сроков лечения.

По принятой классификации ген обозначается числом, а подтип маленькой латинской буквой.

Расшифровка таблицы генотипов вируса С:

  • Генотип 1а, 1b, 1с
  • Генотип 2а, 2b, 2с, 2 d
  • Генотип 3а, 3b, 3с, 3d, 3e, 3f
  • Генотип 4а, 4b, 4с, 4d, 4e, 4f, 4g, 4 h, 4 i, 4 j
  • Генотип 5 а
  • Генотип 6 а

Самые распространенные генотипы 1,2,3. В России чаще всего встречаются 1а, 1b, 2 и 3 штаммы вируса С.

Генотип вируса 1b труднее других поддается лечению, в 90% переходит в хроническую форму, из которых 30% перерождаются в рак или цирроз печени.

Генотипы 2а и 3а имеют степень хронизации 33-50 %, более отзывчивы на противовирусную терапию.

При подтверждении присутствия вируса проводится ПЦР количественный на гепатит С, с помощью которого рассчитывают количество молекул РНК, находящихся в лабораторном образце больного.

Расшифровка анализа

Качественный ПЦР анализ имеет два ответа:

  • отрицательный;
  • положительный.

ПЦР отрицательный означает, что возбудитель в образцах крови не обнаружен.
Положительный ответ свидетельствует об обратном: обнаружены РНК того или иного генотипа вируса С.

Вероятность достоверности результата равна 95%. Остальные 5% — это ошибка по вине человека. Такая возможность допускается из-за высоких требований к проведению исследования:

  • правил хранения реактивов;
  • соответствующей квалификации медперсонала;
  • чистоты биоматериала.

Сам набор ПЦР имеет 100% диагностическую точность.

Количественный ПЦР РНК гепатита С позволяет определить вирусную нагрузку на организм больного. С его помощью:

  • уточняется стадия заболевания (острая, хроническая);
  • определяется эффективность противовирусного лечения;
  • выясняется необходимость биопсии печени.

В некоторых случаях больной не ощущает никаких признаков болезни, в то время как методом ПЦР установлено инфицирование ВГС. Это означает, что заболевание находится на ранней стадии развития либо в хронической форме. Для уточнения диагноза необходимы дополнительные исследования, для скорейшего начала противовирусного лечения.

Вирусная нагрузка при гепатите С

Вирусная нагрузка показывает активность печеночного вируса, насколько активно происходит его размножение.

Что это?

ПЦР количественный гепатита С измеряется в Международных Единицах на 1 мл или МЕ/мл, что означает, сколько в 1 мл исследуемой крови обнаружено копий рибонуклеиновой кислоты определенного штамма вируса С.

Какая считается высокой, какая низкой?

Анализ на вирусную нагрузку позволяет определить наличие вирусных РНК в концентрации 50 МЕ/мл. Вирусная нагрузка в нормеэто когда ПЦР не обнаружено ни одной молекулы РНК ВГС.

Таблица вирусной нагрузки:

  • низкая – концентрация от 600 МЕ/мл 3*104 МЕ/мл;
  • средняя – концентрация от 3*104 МЕ/мл до 8*105МЕмл;
  • высокая – уровень более 8*105 МЕ/мл.

Низкая вирусная нагрузка – это сигнал, что терапевтическое лечение подобрано правильно, и прогноз на излечение от гепатита С – благоприятный.

Высокая концентрация вирусных клеток свидетельствует, что болезнь находится в острой фазе. Кровь пациента является опасным источником инфекции.

Вирусная нагрузка, показатели которой находятся на среднем уровне, характеризует либо хроническую стадию ГВС, либо может иметь два тренда развития: к ее повышению или понижению.

Внимание! Количественное тестирование проводится на протяжении всей антивирусной терапии: через 4, 12 и 24 недели, цель которой – снизить вирусную нагрузку.

По ее окончании – через 6 месяцев делается контрольная ПЦР.

Оценка результатов

Качественные тесты ПЦР имеют определенную степень чувствительности, и в зависимости от точности проведения исследований и уровня аппаратуры в лаборатории могут варьироваться в пределах от 10 до 500 МЕ/мл.

Это обозначает, что если вирус в пробе крови присутствует в очень малой концентрации (меньше порогового значения чувствительности данной лаборатории), то у больного пациента может быть определен результат как «не обнаружено».

Из-за этого при проведении качественного анализа ПЦР с низким уровнем виремии (малой концентрацией вируса), к примеру, для больных, проходящих лечение противовирусной терапией, очень важно знать и порог чувствительности данной диагностической системы.

Варианты диагностических систем

Для контролирования вирусологического ответа, при проведении противовирусного лечения рекомендуется использовать диагностические системы с порогом чувствительности не меньше 50 МЕ/мл. Этим критериям соответствуют, к примеру: анализаторы Cobas Ampicolor ВГС-Теst (c точностью 50 МЕ/мл), а также РеалБест РНК ВГС (с чувствительностью 15 МЕ/мл).

Пцр на гепатит в: как расшифровать и его нормы

ПЦР анализ – что это такое, расшифровка, вирусная нагрузка

Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В.

Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца.

ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.

При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.

Виды ПЦР на вирусный гепатит В

Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

Качественный ПЦР и его трактовка

Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

  • отрицательный результат — вируса нет;
  • положительный результат — вирус обнаружен.

Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

Количественный ПЦР

Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

  1. Перед назначением лечения.
  2. Для оценки эффективности терапии.
  3. Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
  4. Для определения стадии, на которой находится заболевание.

Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

1 МЕ/мл = 5 копий/мл

Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

Трактовка количественного ПЦР

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

  • < 103 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
  • от 104 до 105 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
  • 106 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
  • 107 — виремия большая, вирус высокоактивен.

Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:

  1. Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 105 копий.
  2. Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 105 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
  3. Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
  4. Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
  5. Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 105 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

  • ДНК ВГВ < 2 х 104 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
  • ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 104 до 2 х 106 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
  • ДНК ВГВ > 2 х 106 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

Подготовка к обследованию

Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

  1. Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
  2. Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
  3. Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.

Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

Подводя итоги

На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом.

Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение.

В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.